בדיקות חדשות במעבדות מילודע

בדיקת ליגיונלה לפי ISO11731:2017

תקן ה- ISO 11731 הינו תקן בין-לאומי ומשמש לניטור ליגיונלה בכל העולם.

 חיידקי הלגיונלה נמצאים לעתים קרובות באדמה ובמים מתוקים. חיידקי הליגיונלה יכולים לשרוד בסביבה בטמפרטורות נמוכות וגבוהות יחסית ללא הרבה חומר אורגני זמין וכן יכולים לייצר ביופילם יציב ועמיד יחסית לטיפולי חיטוי מקובלים.

אספקת המים של בניין היא לעתים קרובות המקור להתפרצות לגיונלה. מאחר והחיידקים נמצאים כחלק מהביופילם שנוצר בחלק הפנימי של צינורות מים ומכלים הם עלולים להשתחרר בטיפול מים קטנות המשתחררים ממערכות המים (אירוסולים) או לעתים רחוקות יותר שאיפה של מים מזוהמים כפי שנוצר על ידי ראשי מקלחת, ערפל, מזרקות דקורטיביות, אמבטיות ג'קוזי או מגדלי קירור מים למיזוג אוויר.

שיטת הבדיקה לפי - ISO11731:2017 מפרטת את אופן בידוד וספירה של חיידקים מהמין לגיונלה וליגיונלה פניאומופילה באמצעות תרבית של דגימות מים מרוכזות. הדגימות מטופלות בחום ובחומצה כדי להפחית את חיידקי הרקע, בנוסף לחלק מדגימה הלא מטופלת. לאחר מכן, הדוגמאות נזרעות על גבי צלחות פטרי המכילות מצעים מיוחדים התומכים בגידול של חיידקים ממין זה.

מושבות חשודות מזוהות כלגיונלה וליגיונלה פניאומופילה באמצעות סדרה של שלבי אישור.

שיטת הבדיקה לפי   ISO 11731 התקן הבין-לאומי, דורשת הדגרה של צלחות הבדיקה של 10 ימים.

מים הם סוגי דגימות מקובלים.

בדיקת קוליפורמים פקאליים במים בשיטת Defined Substrate Technology (DST)

השיטה מזהה בו-זמנית כלל קוליפורמים ו Escherichia coli במים, או א.קולי וקוליפורמים צואתיים בשפכים תוך קבלת תוצאות בזמן קצר (24 שעות).

השיטה משתמשת באינדיקטורים ONPG ו-MUG לזיהוי חיידקים מקבוצת הקוליפורמים וחיידקי E. coli. חיידקים מקבוצת הקוליפורמים משתמשים באנזים β-galactosidase שלהם כדי לבצע חילוף חומרים של ONPG ולשנות אותו מחסר צבע לצהוב. חיידקי  E. coli משתמשים ב-β-glucuronidase לחילוף חומרים של MUG וליצור פלואורסצנטיות. לרוב החיידקים שאינם קוליפורמים אינם נושאים אנזימים אלו או שמעוכבים על ידי חומרים סלקטיביים במבחן Colilert-18.

שיטה זו שונה מהשיטות המסורתיות הקיימות כיום האורכות 48 עד 96 שעות ועושות שימוש בגידול במצעים סלקטיביים שונים ובטמפרטורות שונות. השיטות הקיימות דורשות הכנת מצעים ארוכה וכן פינוי של הרבה כלי זכוכית והדיוק של שיטות אלה נמוך יחסית.

פסאודומונס בשיטה מהירה- Pseudalert

הבדיקה המקובלת לפסאודומונס אאירוגינוזה בדגימות מים מבוצעת בשיטת הסינון הממברנאלי והתוצאות מתקבלות לאחר 72 שעות.

השיטה המהירה, Pseudalert , מזהה חיידקים מהמין P. aeruginosa תוך 24 שעות ללא שלבי אישור נוספים.

השיטה מבוססת על טכנולוגיית זיהוי אנזימים המצביעים על נוכחות של חיידקי P. aeruginosa באמצעות הידרוליזה של המצע.

במצבים בהם בטיחות אספקת המים היא קריטית, מהירות קבלת תוצאה איכותית ואמינה הינה בעלת חשיבות רבה, במיוחד במים המיועדים לשתיה, מי דיאליזה ובתי חולים.

בדיקת סלמונלה מהירה Suretect / ליסטריה מהירה  Suretect /ליסטריה מונוציטוג'נס  Suretect - שיטה מולקולארית

מניעת זיהום מזון על ידי חיידקים פתוגניים מהווה מטרה קריטית של בריאות הציבור עבור צרכנים ברחבי העולם. ההשלכות הכלכליות משמעותיות גם עבור היצרנים והתעשייה.

בשיטה החדשה משתמשים בפלטפורמת Real Time PCR – Polymerase Chain Reaction , בעזרת קיט מסחרי. קיטים מבוססי  PCR משתמשים באנזים (Taq polymerase) כדי להגביר מקטע ייחודי  מה-DNA של מיקרואורגניזם המטרה.  התגובה כרוכה בהצמדת פריימרים ופרוב מסומן בצבע פלורסנטי לרצף  DNA ייחודי והגברתו באופן ספציפי.

ככל שכמות תוצר ה-PCR עולה, עולה גם העוצמה של הצבע הפלורסנטי.

היתרון של פורמט בדיקה מהירה זה הוא, שניתן לזהות כמויות נמוכות מאוד של הפתוגן בפרק זמן קצר יחסית ובכמות גדולה של דוגמאות בבת אחת.

המהירות בה ניתן לספק תוצאה אמינה עבור כל דוגמא, היא משמעותית כאשר מדובר בבריאות הציבור, מוצרים בעלי חיי מדף קצרים ועבור יצרני מזון בתהליך הייצור עצמו.

בדיקת LAL eclipse - שיטה כרומוגנית קינטית

הבדיקה מודדת את ריכוז האנדוטוקסינים הנמצאים בתמיסה בשיטה כרומוגנית קינטית.

הבדיקה מתבצעת באמצעות ראגנטLAL  וספקטרופוטומטר לקביעת ריכוז האנדוטוקסינים בשיטת Kinetic Chromogenic, השיטה עושה שימוש במכשיר צנטרופוגלי.

 LAL (Limulus Amebocyte Lysate) הינו מיצוי מתאי דם של horseshoe crab (Limulus Polyphemus). מיצוי זה יוצר צבע בנוכחות ריכוז נמוך של אנדוטוקסינים ממקור חיידקי.

בשיטת Kinetic Chromogenic נמדד הצפיפות האופטית של הצבע של תוצר הריאקציה של תמיסת ה-LAL והדוגמא באורך גל של 405nm ובמרווחי זמן קבועים של 5 שניות לאורך הבדיקה.

התוכנה מנתחת את הנתונים וקובעת את זמן הדרוש עד להשגת צפיפות אופטית המוגדרת ע"י ערך סף.

זמן זה נקרא ONSET REACTION TIME, ככל שרמת האנדוטוקסינים גבוה יותר, זמן זה יורד. LOG ריכוז האנדוטוקסינים יחסי הפוך ל-LOG ה- ONSET TIME.

בעזרת הצנטריפוגה המכשיר מחלק את הריאגנט לדוגמאות באופן שווה וגם חשוב להוצאת בועות האוויר מהדוגמאות, בנוסף המכשיר עובד באינקובציה של הדוגמאות ל 37 מע"צ.

המכשיר הוא חצי אוטומטי וקל לתפעול בהשוואה לשיטה הטורבידומטרית קינטית עקומת הסטנדרט וה SPIKE קיימים בתוך הבאריות כך שאין עבודת פיפטציה מדוייקת של העובד והמיומנות והמהירות פחות משמעותיות.

בנוסף, מוצרים בעלי עכירות טבעית שקיימת בעיה לבדוק אותם בשיטה הטרובידומטרית נקראים היטב בשיטה זו.